细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
下列是产品的订购信息:
产品名称
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规格
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型号
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大鼠肺大动脉平滑肌细胞
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5×10?Cells/T25培养瓶
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GOY-01X0727
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)?;灰翰?检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
100g 氯化镁六水 Magnesium Chloride, Hexahydrate 室温干燥保存
50T 梅毒螺旋体PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
5 mg Dihydroethidium(超氧化物阴离子荧光探针) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL Bicarbonate Buffer(盐缓冲液),1M,pH9.0 Bicarbonate Buffer,1M,pH9.0 常温保存
25mL 超敏化学发光(HRP)检测试剂盒 Ultrasensitive ECL Kit 4℃保存
2 ug pACYCDuet-1 pACYCDuet-1 低温运输,-20℃保存
支原体琼脂培养基(含) Mycoplasma Agar Base 250g
1瓶 FRhK-4细胞株 FRhK-4 低温运输和保存
含225ml10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤均质袋 10% NaCl Trypticase Soy Broth 10个/包
1500 U 限制性内切EcoRV Restriction Endonuclease -20℃保存
100mL Prehybridization Solutions in SSC Prehybridization Solutions in SSC 常温保存
10mL 溶液,50mg/mL Streptomycin Sulfate Solution 4℃避光保存
2 ug pQE-31 pQE-31 低温运输,-20℃保存
200mL 自诱导培养基(lac启动子) Auto-induction Medium 常温
大鼠肺大动脉平滑肌细胞真/酵母琥珀酸脱氢酶(SDH)活性比色法定量检测试剂盒 20次
燕麦β-葡聚糖含量酶连续反应比色法定量检测试剂盒 20次
真/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒 (过氧亚硝基阴离子)20次
基因检测试剂盒
冰冻切片罗丹宁(RHODANINE)铜染色试剂盒 50次
组织赖氨酸(lysine)含量化学比色法定量检测试剂盒 20次
TNF BETA蛋白共沉淀分析试剂盒 5次
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2C8(PACLILAXEL)活性20次
细胞钙钠交换体(NCX)蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10/50 次
全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 20次
细β-内酰胺酶报告基因活性比色法定量检测试剂盒 20次
血液超氧化物阴离子化学发光法定量检测试剂盒 20次