细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
下列是产品的订购信息:
产品名称
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规格
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型号
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NCI-H146 [H146](人小细胞肺癌细胞)
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1×10?cells/T25培养瓶
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GOY-01X0669
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
5g 6- 羟基多巴胺 6-Hydroxydopamine HBr -20℃保存
50T 口蹄疫病毒基因分型PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
500 mL MEM培养基(含1%双抗+10%小牛血清) Cell Culture Medium -20℃保存
100mL ADA Buffer,0.5M,pH6.0 ADA Buffer,0.5M,pH6.0 常温保存
1000mL 超快蛋白银染试剂盒 Rapid Silver Stain for Protein 常温保存
2 ug pGBK-P53 pGBK-P53 低温运输,-20℃保存
制备培养基 Penicillinase Preparation Medium 250g
1瓶 HBZY-1细胞株 HBZY-1 低温运输和保存
Baird-Parker琼脂平板(9cm) Baird-Parker Agar Base 10个/包
100U CpG 甲基转移(M.SssI) CpG Methyltransferase(M.SssI) -20℃保存
100mL PIPES Buffer,0.5M, pH7.4 PIPES Buffer,0.5M, pH7.4 常温保存
100mL YPD液体培养基 YPG Liquid Medium 常温
2 ug pBaBe H-Ras 12V pBaBe H-Ras 12V 低温运输,-20℃保存
1Vial 8- 氮杂 8-Azaguanine -20℃保存
NCI-H146 [H146](人小细胞肺癌细胞) 寡核苷酸探针非同位素AP化学发光法DNA南方杂交完全试剂盒 5次
虫卵细胞活力和死亡体外裂卵(in vitro excystation)定量检测试剂盒 20次
通用型CHIP DNA分子库构建试剂盒 10次
通用型植物样品细胞周期G1/S和G2/M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒 10次
鱼肝油维生素A含量荧光定量检测试剂盒 20次
动物细胞/组织细胞色素C释放比色法定量检测试剂盒 10次
豆类半乳甘露糖比色法定量检测试剂盒 20次
细胞BAX蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 10/20次
定性基因检测试剂盒
细胞IKB-ALPHA蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10/50 次
植物弥散吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量检测试剂盒 (包括萃?。?0次
非同位素HRP-DAB显色法RNA北方杂交试剂盒 5次