培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)?;灰翰?检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
下列是产品的订购信息:
产品名称
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规格
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型号
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HFF (人包皮成纤维细胞)
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1×10?cells/T25培养瓶
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GOY-01X0611
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
50mL Nickel Chloride Solution(氯化镍溶液),0.5M Nickel Chloride Solution,0.5M 常温保存
20次 即用型蓝白T载体C型(T7-T3,无MCS) Instant Blue-White Vector T,Type C -20℃保存
2 ug pMK-SCN5A donor(310) pMK-SCN5A donor(310) 低温运输,-20℃保存
猪胆粉 250g
1瓶 Sp2/0-Ag14细胞株 Sp2/0-Ag14 低温运输和保存
尿素琼脂(PH7.2) Urease Agar Base 250g
10L DMEM( 高糖 ) DMEM(High Glucose) 4℃保存
5次 大提柱式DNA Maxi Column DNA Erasol 溶液A需4℃保存,其余可以室温保存
1g 2,3,5 氯化三苯基四氮唑 2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazolium Chloride(TTC) 室温干燥避光保存
50T 猪链球菌Ⅱ型PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
200次 ATP检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存
100mL Kinase Storage Buffer Kinase Storage Buffer 常温保存
50次 两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) Two-Tube RT PCR Kit -20℃保存
2 ug pLVTHM pLVTHM 低温运输,-20℃保存
HFF (人包皮成纤维细胞)D-半乳糖待测样品处理试剂盒 20次
全组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法10次
载玻片细胞PDGF-B蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次
通用型vero大肠杆志贺氏-1(VTEC - Shigatoxin 1)20次
通用型疫病种(Phytophthora species)基因检测试剂盒 20次
冰冻切片组织TNF BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次
植物组织可溶性胞浆蛋白高纯制备试剂盒 10次
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP1A2(MROD)活性20次
寡核苷酸探针非同位素地高辛AP-BCIP/NBT法RNA北方杂交完全试剂盒 5次
石蜡切片组织组蛋白NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次
大量Lipofusin脂质体细胞转染试剂盒 10次/100次
细胞氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒 (羟自由基)20次