培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
下列是产品的订购信息:
产品名称
|
规格
|
型号
|
LN229 (人大脑神经母瘤细胞)
|
1×10?cells/T25培养瓶
|
GOY-01X0565
|
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
重水,氘(0.6ml*10) 质量规格:>99%,USP,BR Carisoprodol
重水,氘(0.55ml*10) 质量规格:HPLC>98%,标准品 Carisoprodol
重水 99.8原子%D 质量规格:> 99%,EP Carvedilol
重楼皂苷VII(标准品) 质量规格:HPLC>98%,标准品 Carvedilol
重楼皂苷VI(标准品) 质量规格:含量> 99% Cediranib
重楼皂苷II(标准品) 质量规格:含量> 99%,BR,可用于细胞培养 Celecoxib
重楼皂苷I(标准品) 质量规格:HPLC>98%,标准品 Celecoxib
重酒石长春瑞宾(标准品) 质量规格:>95%,EP,BR Chlortetracycline HCl
重酒石胆碱(>98%,BR) 质量规格:效价测定 Chlortetracycline HCl
仲辛(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 质量规格:>99%,USP34 Cilostazol
RNasefree 化溶液,10MAcetate Buffer,1M,pH5.5 1 管
RNasefree PVP K30溶液,20%Acetonitrile1 管
RNasefree Sarkosyl溶液,10%Acetosyringone1 管
RNasefree SDS溶液,10%Acetyl Coenzyme A 1 管
RNasefree 钠,3M,pH 5.2Acetylcholine Chloride1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 6.5AcetyLCystein1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 7.0AcetylDGlucosamine1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 7.5Acetylsalicylic Acid1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 8.0ACHN1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 8.5Acidic Phenol1 管
RNasefree Tris HCl,1M,pH 9.0AcidWashed Glassbeads1 管
RNA级CTAB (十六基三基化铵)Acridine Orange1 管
RNA级DEPC (焦二酯)Acryl DNADOWN1 管
RNA级DTT (二代苏糖)Acrylamide1 管
RNA级EDTA·2Na (二四二钠) Acrylamide Solution(19:1Po`wder),EG1 管
人参皂甙 Rb3 68406268
Ginsenoside Rb3 特价促销 分子式:C53H90O22 分子量:1079.27
人参皂甙 RB3备注:
人参皂甙 RB2 11021139
GINSENOSIDE RB2 特价促销 分子式:C53H90O22 分子量:1079.27
人参皂苷 RB2,人参皂苷RB2备注:
人参皂苷 Rb1 41753439
Ginsenoside Rb1 特价促销 分子式:C54H92O23 分子量:1109.29
人参皂甙 Rb1 人参皂甙备注:
拟人参皂苷 F11 69884000
(3b,6a,12b,24R)20,24Epoxy3,12,25 特价促销 分子式:C42H72O14 分子量:801.01
LN229 (人大脑神经母瘤细胞) 脉冲凝胶电泳DNA产物酶切试剂盒 20次
荧光定量检测试剂盒
等电聚焦蛋白电泳(IEF)强化补水缓冲液50毫升
名称规格
组织脯氨酸(proline)含量比色法定量检测试剂盒 20次
石蜡切片组织衰老特异性早期脂褐素油性红原位间接染色试剂盒 10次
通用型叶酸(folic acid)含量比色法定量检测试剂盒 20次
组织样品组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)活性比色法定量检测试剂盒 20次
通用型山羊关节炎脑炎病毒梅迪-维斯纳病毒(Caprine Arthritis Encephalitis Virus/Maedi-Visna Virus;CAEV/MVV)20次
AKT蛋白表达西方杂交分析试剂盒 5次
酒类精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 20次
载玻片细胞ERK蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次