使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称
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规格
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货号
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鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒
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50T
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GOY-M1851
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特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
AP底物pNPP缓冲溶液 100毫升
HRP底物OPD缓冲溶液 100毫升
HRP底物TMB缓冲溶液 100毫升
HRP反应终止缓冲液 100毫升
AP反应终止缓冲液 100毫升
荧光或共聚焦显微镜制片处理试剂专题
荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液(荧光稳定、长久保存) 5/20毫升
抗淬灭剂Ⅰ(活体染色持久发光) 5/20毫升
抗淬灭剂Ⅱ(荧光增强、持久发光) 5毫升
组织切片制片处理试剂专题
冰冻切片制片处理试剂盒 10次
冰冻切片制片预处理固着液 100毫升
鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒酒石酸铜三水(>98%,BR) Copper(II) tartrate, trihydrate 815-82-7 质量规格:>98%,BR 一步法RT-PCR试剂盒 进口/国产 规格:20/50次
2'-脱氧腺苷5'二磷酸三钠盐(>97%,BR) dADP 72003-83-9 质量规格:>97%,BR 直接细胞克隆两步法逆转录PCR试剂盒 进口/国产 规格:100次
2'-脱氧胞苷-5'-二磷酸三钠盐(分子生物学级) dCDP, 2'-Deoxycytidine-5'-Diphosphate,3sodium salt 151151-32-5 质量规格:>97%,分子生物学级 两步法RT-PCR荧光定量试剂盒 进口/国产 规格:20/50次
DMP DMP 34490-86-3 质量规格:BR 逆转录RT试剂盒 进口/国产 规格:20/50次
没食子酸月桂酯(>98.5%,BR) Dodecyl gallate 1166-52-5 质量规格:>98.5%,BR 体外RNA转录合成试剂盒 进口/国产 规格:10次
dUMP;2'-脱氧尿苷-5'-磷酸二钠盐 dUMP, 2'-Deoxyuridine-5'-monophosphate, disodium salt 42155-08-8 质量规格:>98%,BR 体外加帽RNA转录合成试剂盒 进口/国产 规格:10次
3-吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR) Indoxyl-Glucoside 487-60-5 质量规格:>98%,BR RNasin(核糖核酸酶抑制剂) 进口/国产 规格:2500 U
氧化镧(>99%,EP) Lanthanum(III) oxide 1312-81-8 质量规格:>99%,EP MMLV(H点突变) 进口/国产 规格:2500 U
氯化镁六水(分子生物学) Magnesium chloride, hexahydrate 7791-18-6 质量规格:>99%,分子生物学级 Oligo(dT)18(500纳克/微升) 进口/国产 规格:100微升
醋酸锰四水 Manganese (II) acetate, tetrahydrate 6156-78-1 质量规格:>98%,BC Hexamer(随机引物)(200纳克/微升) 进口/国产 规格:100微升
神经氨酸酶(≥10 units/ mg ) Neuraminidase from Clostridium perfringens 9001-67-6 质量规格:≥10 units/ mg SOCS 进口/国产 规格:20
乙酸镍四水(>98%,BC) Nickel (II) acetate, tetrahydrate 6018-89-9 质量规格:>98%,BC 甲醛变性RNA垂直电泳全套试剂盒 进口/国产 规格:10次
尼罗红(>95%,BS) Nile red 7385-67-3 质量规格:>95%,BS 北方杂交印迹消除试剂盒 进口/国产 规格:20次
N-苯基脲(>97%,BR) N-Phenylurea 23658 质量规格:>97%,BR 3’末端RNA同位素([γ32P]ATP)激酶标记试剂盒 进口/国产 规格:10次