使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
GSK369796 Dihydrochloride hERG钾离子通道抑制剂(GSK369796 Dihydrochloride) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Sofosbuvir impurity M HCVRNA复制抑制剂(PSI-7977) 1mL(10mM)|1mg|5mg
Sofosbuvir impurity H HCVRNA复制抑制剂(Sofosbuvir impurity H) 1mL(10mM)|1mg|5mg
Valpromide 人类环氧化物水解酶抑制剂(Valpromide) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
T-00127_HEV1 PI4KB抑制剂(T-00127_HEV1) 1mL(10mM)|5mg
Sofosbuvir impurity F HCVRNA复制抑制剂(Sofosbuvir impurity F) 1mL(10mM)|1mg|5mg
AAI101 β-lactamase抑制剂(AAI101) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
Pocapavir 肠病毒衣壳抑制剂(Pocapavir) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
Eugenol 脂质过氧化抑制剂(Eugenol) 1mL(10mM)|100mg|500mg
Ravuconazole 真抑制剂(Ravuconazole) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg
Amitraz 单胺氧化酶和前列腺素合成抑制剂(Amitraz) 1mL(10mM)|100mg
M2 ion channel blocker M2离子通道抑制剂(M2 ion channel blocker) 1mL(10mM)|100mg
RNPA1000 微生物RnpA抑制剂(RNPA1000) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
PLpro inhibitor PLpro抑制剂(PLpro inhibitor) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
溶藻弧菌PCR检测试剂盒大鼠血纤蛋白原 96TFbg ELISA Kit
小鼠β干扰素 96TIFN- Beta/IFNB(Mouse Interferon Beta) ELISA Kit
小鼠白三烯C4 96TLTC4(Mouse Leukotriene C4) ELISA Kit
人抗BP180抗体 96TBP180-Ab(Human anti-Bullous Pemphigoid 180 antibody) ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白1 96TMCP-1/CCL2/MCAF ELISA KIT
大鼠双氢睾酮 96TDHT ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3 96TTIMP-3 ELISA Kit
大鼠红细胞**素 96TEPO ELISA Kit
人利什曼原虫抗体 96THuman Leishimaria antibody ELISA Kit
人重酒石酸去甲肾上素 96TNE-B(Human Noradrenaline Bitartas) ELISA Kit
大鼠活化素A 96TACV-A ELISA Kit