使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
Pluripotin RSK2抑制剂(Pluripotin) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
CASIN GTPase Cdc42抑制剂(CASIN) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
PHT-427 Akt和PDPK1双重抑制剂(PHT-427) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
AG1024 IGF-1R自磷酸化抑制剂(AG1024) 1mL(10mM)|5mg|10mg
PF-543 Citrate SPHK1抑制剂(PF-543 Citrate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
TG003 Clk1/Sty抑制剂(TG003) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
DMH-1 BMP抑制剂(DMH-1) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
MI-773 MDM2-p53相互作用抑制剂(MI-773) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
LEE011 hydrochloride CDK抑制剂(LEE011 hydrochloride) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
AZD 6482 PI3Kβ抑制剂(AZD 6482) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
ML216 BLM解螺旋酶抑制剂(ML216) 5mg|10mg|25mg|50mg
L67 DNA连接酶抑制剂(L67) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
NK-252 Nrf2激活剂(NK-252) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
L-778123 hydrochloride FPTase和GGPTase-I双重抑制剂(L-778123 hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
毛滴虫PCR检测试剂盒Cy3标记的羊抗鸡IgG 0.1mlGoat Anti-Chicken IgG/Cy3
PE-Cy3标记的小鼠抗人IgM 0.1mlMouse Anti-human IgM/PE-Cy3
碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗大鼠IgG 0.1mlMouse Anti-rat IgG/AP
PE-Cy5.5标记的兔抗生物素抗体IgG 0.1mlRabbit Anti-Biotin/PE-Cy5.5
Alexa Fluor 555标记的兔抗豚鼠IgG 0.1mlRabbit Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555
PE-Cy3标记的兔抗鸡IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy3
Alexa Fluor 488标记的兔抗人IgM 0.1mlRabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 488
Cy7标记的兔抗小鼠IgG 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG/Cy7
PE-Cy3标记的兔抗猪IgG 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/PE-Cy3
Cy3标记的驴抗兔IgG 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/Cy3
囊素三肽/三肽囊素/鸡法氏囊三肽 100mgBursin