特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
改良绿色酵母和真肉汤 m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH 250g
Littman琼脂 Littman Agar 250g
DG-18琼脂 DG-18 Agar 250g
YM琼脂 YM Agar 250g
YM11琼脂 YM11 Agar 250g
OGY琼脂 OGY Agar 250g
WL营养琼脂 WL Nutrient Agar 250g
改良沙氏琼脂培养基 Sabouraud's Agar,Modified 250g
沙氏BHI琼脂 Sabouraud BHI Agar 250g
高渗真学琼脂 Osmophilic Mycophile Agar 250g
营养盐琼脂 Nutrient agar 250g
马铃薯葡萄糖琼脂(含氯霉素) Potato Dextrose Agar(Chloramphenicol) 250
BIGGY琼脂 BIGGY Agar 250g
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毛癣菌通用PCR检测试剂盒磷酸化乙酰辅酶A羧化酶抗体 规格: 0.1ml 英文名称: phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase alpha (Ser80)
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睾受体相关蛋白16抗体 规格: 0.1ml 英文名称: TRA16
B细胞白血病/瘤蛋白7抗体 规格: 0.2ml 英文名称: BCL7C
骨髓基质干细胞抗原1抗体 规格: 0.2ml 英文名称: BST1
磷酸化Bcl-2抗体 规格: 0.1ml 英文名称: Phospho-Bcl-2(Thr129)
Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗体 规格: 0.1ml 英文名称: BAG3
相关死亡促进因子Bad抗体 规格: 0.1ml 英文名称: Bad
粘蛋白/岩藻糖基转移酶3抗体 规格: 0.2ml 英文名称: Blood Group Lewis b
6号染色体开放阅读框154抗体 规格: 0.1ml 英文名称: C6ORF154
细胞色素B抗体 规格: 0.2ml 英文名称: Cytochrome B