服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
缓冲动力-硝酸盐 生化鉴定 20支/盒
缓冲动力-硝酸盐培养基 供产气荚膜梭动力和硝酸盐还原测定用 250g
缓冲-甘油氯化钠溶液 用于样品的保存。(GB 4789.13-2010) 250g
缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR-VP培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基) 用于MR和VP试验 250g
煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) 用于多管发酵法测定大肠群的确证试验。 10mlX20支
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB 用于多管发酵法测定大肠群的确证试验(GB 4789.3-2010和SN0169-92)。 250g
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB瓶装颗粒培养基 用于多管发酵法测定大肠群的确证试验 250g
煌绿乳糖胆盐肉汤颗粒培养基 用于多管发酵法测定大肠群的确证试验 10袋(300mL/袋)
霍乱弧生化鉴定盒 霍乱弧生化鉴定 11种×10次
霍乱弧生化鉴定盒(24种×5次/盒) 鉴定霍乱弧常规生化反应24项(参考“中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN/T1022-2010”)。 24种×5次/盒
霍乱弧显色培养基 用于水产品及食物中毒样品中霍乱弧的分离和鉴定 1000ml
肌醇测定培养基 用于微生物法测定婴幼儿食品和乳品中的肌醇含量。 100g
肌醇生化鉴定管 生化鉴定管 20支/盒
即用型营养琼脂平板 用于总数的测定。(GB、ISO) 90mmX20个
轻型链球菌PCR检测试剂盒内皮素-1(抗原) 0.5mgEndothelin-1 (ET-1)
胰岛素受体底物-2(抗原) 0.5mgIRS-2
丁酰胆碱脂酶抗原(C端) 0.5mgBCHE(butyrylcholinesterase)CT
胶质细胞系源性神经营养因子(多肽) 0.5mgTmR2(GDNFR Beta;TRN-R;GFR-alpha-2;NTNR-2)
降钙素受体样蛋白抗原 0.5mgCRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor)
CD40L抗原 0.5mgCD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154)
红细胞**素受体抗原 0.5mgEPOR peptide
葡萄糖调节蛋白78抗原(热休克蛋白70蛋白5) 0.5mgGRP78(glucose regulated protein 78)
白介素16抗原 0.5mgIL-16(Interleukin-16)
抑癌基因抗原 0.5mgMaspin (mammary serine protease inhibitor)
核因子2相关因子2抗原 0.5mgNrf2 peptide