使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
60g/L氯化钠蛋白胨水(PW) 用于副溶血性弧增培养。(SN 0173-92) 250g
7%NaCl胨水生化鉴定管 用于弧的耐盐试验。 20支/盒
7.0L密封培养灌 使用3.5L厌氧产气剂两袋或者2.5L厌氧产气剂三袋;可装42个培养皿。 9.7x13.5x9.5cm
7.5%氯化钠肉汤 用于金黄色葡萄球和其它耐盐的选择性增培养(GB 4789.10-2010和GB7918.5-87)。 250g
7.5%氯化钠肉汤 用于金黄色葡萄球和其他耐盐的选择性增培养。 225ml/X10袋
7.5%氯化钠肉汤颗粒培养基 用于金黄色葡萄球和其它耐盐的选择性增培养 10袋(300mL/袋)
7.5%氯化钠肉汤瓶装颗粒培养基 用于金黄色葡萄球和其它耐盐的选择性增培养 250g
8%NaCl胨水生化鉴定管 用于弧的耐盐试验。 20支/盒
9%NaCl胨水生化鉴定管 用于弧的耐盐试验。 20支/盒
Additives Tyrosine Agar 10支/盒
AHM鉴别培养基 用于致病性嗜水气单胞鉴别,适用于GB/T 18652-2002和SN/T 0751-2010嗜水气单胞检验 250g
Amies运送培养基(不含活性炭) 用于普通微生物标本的运送保存 250g
Amies运送培养基(含活性炭) 250g
Baird-Parker琼脂基础 用于凝固酶阳性葡萄球的选择性分离培养和计数,灭冷却至50℃加入卵黄亚碲酸钾增液。(GB、S... 250g
头状葡萄球菌PCR检测试剂盒麻疹病毒红血球凝集素蛋白多肽 0.5mgMeasles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)
孕诱导阻断因子(抗原) 0.5mgPIBF(progesterone induced blocking factor)
重组人骨形态发生蛋白-2 500ugrhBMP-2/BMP2
人beta 亚基人绒毛膜促性抗原 0.5mgBeta-HCG (Human chorionic gonadotropin Beta)
(亲和纯化) 牛IgM 1mgBovine IgM
四环素偶联鸡卵白蛋白 2mgTetracycline/OVA
荧光素APC标记豚鼠IgG 0.1mlGuinea IgG/APC
(亲和纯化) 猴IgM 1mgMonkey IgM
罗丹明标记猪胰岛素蛋白 0.5mgInsulin Protein/RBITC
乙型肝炎二对半全套(立可读) 96T
兔血清淀粉样蛋白A 96TSAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit