使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称
|
规格
|
货号
|
丹毒丝菌属通用PCR检测试剂盒
|
50T
|
GOY-M0415
|
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
R2A琼脂 英文名称:R2A Agar 产品规格:250g
TGE琼脂 英文名称:TGE Medium 产品规格:250g
CVT琼脂 英文名称:CVT Agar 产品规格:250g
酵母粉琼脂 英文名称:Yeast Extract Agar 产品规格:250g
平板计数琼脂(含麦芽提取物) 英文名称:Plate Count Agar 产品规格:250g
2216E液体培养基 英文名称:2216E Liquid Medium 产品规格:250g
嗜冷计数琼脂 英文名称:Psychrophilic bacteria count agar 产品规格:250g
NA培养基(含葡萄糖) 英文名称:NA Medium 产品规格:250g
MPC琼脂培养基 英文名称:MPC Agar Medium 产品规格:250g
接触皿培养基 英文名称:contacts medium 产品规格:250g
平板计数肉汤(PCB) 英文名称: 产品规格:250g
普通琼脂 英文名称:Nutrient Agar 产品规格:250g
丹毒丝菌属通用PCR检测试剂盒肿瘤坏死因子受体相关因子6抗原 0.5mgTRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)
间隙连接蛋白43(多肽片断抗原) 0.5mgConnexin-43(Cx43)
丝裂原活化蛋白激酶p38(抗原) 0.5mgp38 MAPK/MKK3/MAPKK14
金属蛋白酶组织抑制因子-4(抗原) 0.5mgTIMP-4(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-4)
双微体2癌基因抗原 0.5mgMDM2
畸胎瘤衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)C端 0.5mgCRIPTO
荧光素标记猪胰岛素蛋白 0.5mlInsulin Protein/FITC
荧光素Cy7标记兔IgG(细胞流式同型对照) 0.1mlRabbit IgG/Cy7
荧光素Cy3标记鸡IgG 0.1mlChicken IgG/Cy3
辣根过氧化物酶标记兔抗HRP 0.1mlRabbit Anti-HRP/HRP
兔白介素10 96TIL-10 (Rabbit Interleukin 10) ELISA Kit