使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 |
规格 |
货号 |
虾肝肠微胞虫PCR检测试剂盒 |
50T |
GOY-M0387 |
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
D(+)-Raffinose pentahydrate D(+)-五水棉子糖-密三糖五水17629-30-020mg人前心钠肽(Pro-ANP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔抗HRP-HRP(PAP)0.1ml支植物维生素B12(VB12)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
NKA-2大孔吸附树脂500g瓶人ω干扰素(IFN-ω)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
(+--)-Catechin hydrate DL-儿茶素7295-85-420mg兔子白介素1可溶性受体I (IL-1sR Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
进口双头记号笔(蓝)12支/盒支大鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Glimepiride 格列美脲1g瓶人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
1-Kestose 蔗果三糖470-69-925mg小鼠脱氢表雄酮(DHEA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
ADPNa2 二磷酸腺苷二钠500mg支犬血栓素B2(TXB2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Parthenolide 小白菊内酯20554-84-120mg人乙型肝炎病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Ganoderenic acid A 灵芝酸A81907-62-220mg大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
PCR板10块/包,5包/箱96孔块人基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
N'N-Dimethyldauricine iodideN'N-二甲蝙蝠葛碱碘化物17670-06-310mg小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
虾肝肠微胞虫PCR检测试剂盒FITC标记的兔抗羊IgM 0.3mlRabbit Anti-Goat IgM/FITC
胶体金标记的兔抗人IgG 0.5mlRabbit Anti-human IgG/Gold
PE-Cy3标记的兔抗猴IgG 0.1mlRabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy3
Alexa Fluor 647标记的兔抗大鼠IgG 0.1mlRabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 488标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 0.1mlMouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 488
Alexa Fluor 555标记的兔抗水貂IgG 0.1mlRabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 555
阳离子转运蛋白1 0.5mg42278
半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mgCaspase-6 (CT)
葡萄糖转运蛋白2(抗原) 0.5mgGLUT2(Glucose transporter type 2)
神经母细胞特异性转移因子抗原 0.5mgASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1)
骨成型蛋白受体1A抗原 0.5mgBMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)
传真号码:021-39596320 021-39921927
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产品均为实验试剂,仅供科研实验使用,非药品、非食品、不可用于动物及人体!