使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称
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规格
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货号
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产气荚膜梭状芽孢杆菌通用PCR检测试剂盒
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50T
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GOY-M0275
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特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
Xylene Cyanol FF 二甲苯青FF1g瓶小鼠胃泌素(Gas)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Simvastatin 辛伐他丁250mg瓶人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Monotropein 水晶兰苷5945-50-610mg人游离睾酮(F-TESTO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Evocarpine 吴茱萸新碱15266-38-310mg 96T/48T 试剂盒 组装/原装
30ml亲和层析柱 (2.3×10)30ml个人激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Toddalolactone 毛两面针素483-90-920mg小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
NADP Na2 氧化型辅酶Ⅱ二钠100mg支鸡白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
透析袋 扁宽45 截留分子量35000.5m/即用型管人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Ginsenoside Rg1 人参皂苷Rg122427-39-020mg
甲苯胺蓝溶液100ml瓶人蛋白酪氨酸磷酸酶抗体/胰岛细胞抗原2抗体(IA-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Benzyltrimethylammonium chloride 苄基**化铵100g瓶小鼠β萘酚(β-naphthol)LISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Albumin Egg 卵清蛋白10g瓶大鼠心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
产气荚膜梭状芽孢杆菌通用PCR检测试剂盒人胱天蛋白酶9 96TCasp-9(Human Caspase-9) ELISA Kit
人膜联蛋白Ⅴ 96TANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit
人类似RIKEN cDNA 2610307008 基因 96THuman similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA Kit
人核糖核酸 96TIrna(Human Immune RNA) ELISA Kit
人血栓素A2 96TTX-A2(Human Thromboxane A2) ELISA Kit
人抗风疹病毒IgG抗体 96Tanti-RV IgG(Human anti-rubella virus IgG antibody) ELISA Kit
人凝血酶抗凝血酶复合物 96THuman thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit
人甲状球蛋白 96THuman Thyroglobulin,TG ELISA Kit
大鼠cAMP反应元件结合蛋白 96TRat Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit
多聚赖氨酸(10×防脱片剂) 5mlPoly-L-Lysine Solution(10×)
液体样品RNA提取试剂 20mlTRIquickLS