使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
细胞过滤筛(不锈钢)100目个大鼠抗**内膜抗体(EMAb)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
25cm2正方斜口不透气培养瓶20个包人抗原处理相关转运蛋白(TAP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Lactose 乳糖63-42-3100mg小鼠脱氢表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
CollagenaseⅣ 胶原酶Ⅳ1g支犬叶酸(FA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Wedelolactone 蟛蜞菊内酯524-12-920mg人乙型脑炎病毒抗体(JE-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Phloretin 根皮素60-82-220mg大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
L-Glutamine L-谷氨酰胺56-85-9200mg人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
猪脾脏细胞分离液试剂盒200ml/KIT盒小鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Resazurin 刃天青1g瓶鸡C反应蛋白(CRP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Gibberellin A3 赤霉素GA328281250mg人微管相关蛋白2(MAP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Periplocin 杠柳毒苷13137-64-920mg
CAPS 3-(环己胺)-1-丙磺酸10g瓶人胆固醇(CH)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兽类嗜衣原体PCR检测试剂盒大鼠粒细胞集落刺激因子 96TG-CSF ELISA Kit
大鼠醛固酮 96TALD ELISA Kit
大鼠绒毛膜促性 96TCG ELISA Kit
大鼠趋化因子 96Tfractalkine/CX3CL1 ELISA Kit
人载脂蛋白E 96TApo-E(Human Apolipoprotein E) ELISA Kit
人唾液皮质醇 96THuman Cortisol ELISA Kit
人骨桥素 96TOPN(Human Osteopontin) ELISA Kit
人蛋白激酶A 96TPKA(Human Protein kinase A) ELISA Kit
人芳基硫酸酯酶A 96TASA(Human aryl sulfatase A) ELISA Kit
人胱天蛋白酶3 96TCasp-3(Human Caspase 3) ELISA Kit
人抗肾小管基底膜抗体 96TTBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit